上海沪震实业有限公司
主营产品: elisa试剂盒
NSP试剂盒-神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂-ELISA检测试剂盒
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NSP试剂盒-神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂 ELISA检测试剂盒
- 产品名称:神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(NSP) ELISA 试剂盒
- 产品编号:HZ-NSP-Hu
- 产品规格:96T/48T
- 实验方法:双抗夹心法
- 检测范围:0.781-50ng/mL
- 最低检测限:0.33ng/mL
- 保质期:12个月
- 附件下载:说明书
产品描述
试剂名称 | 数量 | 试剂名称 | 数量 |
96孔板(预包被) | 1 | 96孔板覆膜 | 2 |
标准品 | 2 | 标准品稀释液 | 1×20mL |
检测溶液A | 1×120μL | 检测稀释液A | 1×12mL |
检测溶液B | 1×120μL | 检测稀释液B | 1×12mL |
TMB底物 | 1×9mL | 终止液 | 1×6mL |
浓洗涤液(30×) | 1×20mL | 使用说明书 | 1 |
需自备的设备及试剂
450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)单道或多道微量加液器及吸头
稀释样品的EP管
蒸馏水或去离子水
吸水纸
盛放洗液的容器
试剂盒的储存及有效期
未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液,终止液保存于4℃,其他试剂保存于-20℃。使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃,避免潮湿。
稳定性
经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
注意:
试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。
液体样本的收集
1、血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固 10-20 分钟,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2、血浆:应根据标本的要求选择 EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3、尿液:用无菌管收集,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
4、胸腹水:用无菌管收集,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5、脑脊液:用无菌管收集,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6、唾液:用无菌管收集,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
7、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
8、牛奶:用无菌管收集,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
9、蜂蜜:用无菌管收集,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
10、全血:用含有抗凝剂的无菌管收集,立即轻轻摇动,来回轻轻颠倒数次,使血液和抗凝剂混匀,以防血液凝固。
固体样本的收集
1、组织标本:切割标本后,称取 1g 组织,加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在液氮中充分研磨。
2、细胞内蛋白样本:许多待测蛋白不是分泌蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。
(1)培养的细胞
A、动物细胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀释细胞悬液,使细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,就采用超声波破碎),以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
B、植物细胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀释细胞悬液,使细胞浓度达到 100 万/ml 左右,置于冰盒上,用超声破碎仪,设置破碎 2s,冷却 30s 的方式,充分破碎细胞,以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)组织的细胞
切割标本后,称取 1g 组织,加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分),去除上清,再用 pH7.2-7.4左右的 PBS 小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。
3、细胞内蛋白样本:许多待测蛋白不是分泌蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。
4、咽拭子:加入 2ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,溶解咽拭子头部,摇匀,用镊子取出咽拭子并挤干液体,2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。
5、植物标本:取组织块(0.2g~0.5g)少可到 5~10mg 在冰冷的 PBS 中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入 5ml 的匀浆管中;按重量(mg):体积(ml)=1:9 的比例加入 9 倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块;匀浆的方式:手工匀浆,机器匀浆。 ① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8 分钟),充分研碎,制成 20%的匀浆液。 ② 机器匀浆:用组织捣碎机 10000~15000 转/分 上下研磨制成 10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间 10 秒/次,间隙 30 秒,连续 3~5 次,在冰水中进行,可适当延长匀浆时间),镜检观察:取少量组织匀浆作涂片(直接涂片、染色均可以),显微镜下观察细胞是否破碎,若没有则可延长匀浆时间。将制备好的 10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机 4000 转/分左右,离心 10~15 分钟,取上清液进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!