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原位杂交技术可应用于什么方面

1.细胞特异性mRNA转录的定位 可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。

2.感6染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳3头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。

3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。

４.基因在染色体上的定位。

5.检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等。

6.分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传

多种探针标记检测系统

基于地高3辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。

荧光标记检测常为直接探针标记方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上连接Fluorescein后进行核酸标记。由于标记在核酸上的荧光分子必须经受杂交和洗脱过程中的考验，以及荧光分子易于衰减，其检测灵敏度受到一定的影响。但对荧光分子的直接检测呈现的背景较低。

另一种多聚体促进剂是聚丙0烯0酸，用其钠盐，浓度为2%～4%。与硫酸葡聚糖相比，其优点是价格低廉，粘度低（MW=90 000）。小分子化学试剂酚和Guandine thiocyanate也能促进杂交，它们可能是通过增加水的疏水性和降低双链和单链DNA间的能量差异而发挥作用。酚作为杂交促进剂，只能在低DNA浓度的液相杂交中观察到，该方法曾被称为酚乳化复性技术，该法不能用于固相杂交，因酚可引起核酸与膜的非特异吸附作用，即使在液相杂交中的应用也是有限的。而Guandine thiocyanate可通过降低双链DNA的Tm值而起作用。此外，该分子还可以促进RNA的杂交，有裂解细胞而抑制RNase的作用。总之，硫酸葡聚糖和聚乙二醇因能用于固相杂交是目前zui常用的杂交促进剂。