武汉思特进科技发展有限公司主营：动植物,细菌,细胞生物实验
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样品预处理

在待测样品中，DNA或RNA通常都是被蛋白包裹缠绕，根据不同的细胞和组织样品的应用，可选择合适的预处理方法将靶核酸暴露：

内源性酶灭活：如果探针的检测是通过酶促法进行的，则样品内相应的内源性酶必须被灭活。如内源性的POD可通过含1%H2O2的甲醛溶液处理30min。如果检测酶为AP，可在底物溶液中加入左旋咪唑，AP检测的内源性背景一般来说比POD检测的低得多，因为在杂交过程中，样品中内源性AP酶的活性基本都丧失了。

RNase处理：在DNA-DNA杂交实验中，RNase的处理可去除内源性RNA，增加实验的信噪比。在进行mRNA为靶标的检测时，RNase处理的样品也可作为质控对照。通常的处理方式是将DNase-free的RNase溶解于2×SSC(100μg/ml)，样品在溶液中37℃处理60min。

原位杂交过程

杂交前可进行预杂交，以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同，只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。

靶DNA的变性（对mRNA的原位杂交无需此步）

样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤，但同时可能会造成样品形态学的部分破坏，此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性，实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。

如使用热变性方法，可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行：将样品和探针溶液加盖盖玻片，置于烘箱80℃变性，染色体DNA样品处理2min，后冷却至37℃进行杂交。组织样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。

肝纤维化动物模型特点：

①肝纤维化出现早，出现率高；

②动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；

③纤维化组织中大量胶原，Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA增多。

慢性活动性患者循环复合物多为阳性，猪模型可用于慢性所致肝纤维化的研究，对于研究复合物的形成，沉积和清除及对于防治损伤性肝纤维化有效的筛选，具有意义。

（IDA）发生的主要原因是由于铁的摄入不足和/或铁丢失过多，引起机体血红蛋白合成障碍导

致。IDA模型有大鼠、小鼠、兔、鸡、猫、狗、猴等，其中以大鼠为常用。

动物模型方法：

1. 给予低铁饮食。饲料含铁量≥50mg/kg能满足大鼠的基本需要，低铁饲料的铁含量≤10mg/kg，标准饲

料铁含量为220-270mg/kg。饲料配方以酪蛋白或脱脂奶粉作为蛋白来源，玉米淀粉或蔗糖作为碳水化合物来源，加入植物油，混合维生素和混合无机盐配制。

近来通过络合剂1%EDTA-2Na除去国产饲料中的铁，取得满意的实验结果。

2. 给动物逐次少量放血，造成铁的慢性丢失。通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起铁的丢失，而且还可以引起其它营养素的丢失；另一方面剪尾易

引起动物而。

3. 低铁饮食辅以定期少量放血。