大鼠透明质酸 (HA)ELISA试剂盒

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    大鼠透明质酸 (HA)ELISA试剂盒

样本采集与贮存细胞培养上清2000 × g条件下离心20m分钟，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。血清样本离心管收集血清。血样凝集 30 分钟后，2000 × g 离心 10 分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或者分装，-20℃以下贮存，避免反复冻融。血浆样本EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。2000 × g 离心 20 分钟收集样本。即刻检测， 或者分装，-20℃以下贮存，避免反复冻融。组织样本用预冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(般按1: 9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推 荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进步裂解组织细胞，可以对匀 浆液进行超声破碎或反复冻融。后将匀浆液5000×g离心 5-10分钟，取上清检测。细胞提取液样本贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮 细 胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS 洗涤3次。每 1×106 个细胞中加入150-200μL PBS重悬并通过反 复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS的体积)。将提取液于1500×g离心10分钟，取上清检测。注意：1）避免样本的反复冻融，在检测，冷冻样本应缓慢地恢复至室温，轻柔混匀。 2）本试剂盒可能适用于其它生物学样本，但是未充分验证。 

 大鼠透明质酸 (HA)ELISA试剂盒

试剂准备1）用，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。2）浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结 晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。 

 大鼠透明质酸 (HA)ELISA试剂盒

检测步骤1、试剂、样本平衡：检测之请将所有的试剂、样本平衡至室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。配置工作液：按面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。1）加标准品、样本：设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加待测样本50μL，空白孔不加。2）加 HRP标记抗体：除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。3）孵育：使用封板膜封板，37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。4）洗涤：弃掉液体，每孔加入300μL洗液洗板，静置20s，洗涤5次。每次洗板，在吸水纸上拍 干。为获得理想的实验性能，必须彻底移除残留液体。5）加底物显色：每孔加入50μL显色底物A、B 各50μL，37℃水浴锅或恒温箱温育15分钟。6）加终止液：每孔加入50μL终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化 明显不均匀，请轻轻叩击板框，充分混匀。7）检测读数：在 15分钟之内，使用450nm酶标仪进行检测读数。