博研生物-猪血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒
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猪血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒
为了研制长效犬β干扰素(Ca IFNb)基因工程产品,用聚合酶链反应从犬基因组DNA扩增Ca IFNb成熟肽编码序列,插入类弹性蛋白多肽(ELP)融合表达载体,将重组载体转化大肠杆菌BLR(DE3),用IPTG诱导Ca IFNb-ELP表达,利用ELP介导的温度敏感可逆相变循环(ITC)进行纯化,用50%细胞病变试验检测干扰素活性,用50%小鼠血浆孵育法检测体外半衰期,并与融合组氨酸标签的His-Ca IFNb进行比较.结果显示,在≤28℃条件下,90%Ca IFNb-ELP为可溶性表达,His-Ca IFNb以不溶性包涵体表达;在优化条件下进行1轮ITC,获得的Ca IFNb-ELP的纯度为96%,显著高于以包涵体纯化的His-Ca IFNb的纯度(85%);Ca IFNb-ELP的活性为1×105 U/mg,比His-Ca IFNb的活性高10倍;Ca IFNb-ELP的体外半衰期〉24 h,显著长于His-Ca IFNb的体外半衰期(12 h).结果表明,Ca IFNb-ELP具有表达水平高,纯化简单和体外半衰期较长等优点,有望作为长效干扰素开发利用.
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪白细胞介素1(IL-1)水平.用纯化的猪白细胞介素1抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入猪白细胞介素1,再与HRP标记的IL-1抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的IL-1呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中猪白细胞介素1(IL-1)浓度.