皮肤表皮角质形成细胞和肿瘤原代细胞提取物
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操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。产品仅供科研使用
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
皮肤表皮角质形成细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Skin MatchPair: Normal Keratinocyte Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】
产品描述:人皮肤表皮角质形成细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人皮肤表皮角质形成细胞和肿瘤细胞中提取的,人皮肤表皮角质形成细胞和肿瘤细胞分别从正常人皮肤组织和肿瘤组织中制备。正常人皮肤组织和肿瘤组织采集自各地方医院,采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin),离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。 潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
皮肤表皮角质形成细胞和肿瘤原代细胞提取物 | Human Skin MatchPair: | GOY-Y6834 |
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:产品仅供科研使用
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
以下是公司正在热销的产品:
大鼠心肌细胞RCM岩芹酸(标准品)质量规格:分析标准品,>99%(GC)Petroselinic acid
SRC Others Mouse 小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) D-泛醇(标准品)质量规格:分析标准品D-Panthenol
草鱼肝脏细胞;L8824油红O/溶剂红27/5B质量规格:BSOil red O/Solvent Red 27
CV-1细胞,非洲绿猴肾细胞 人大肠癌细胞,SW116细胞 CM-H133人视网膜muller细胞完全培养基100mLG/溶剂红1/油红113质量规格:BSSudan red G/Solvent Red 1
大鼠骨骼肌成肌细胞;L6苏丹B/溶剂3质量规格:BS(生物染色)Sudan Black B /Solvent Black 3
人心脏微血管内皮细胞RNAHCMEC miRNA5 μg氯磺隆Chlorosulfuron质量规格:>93%,BR
VEGFA Others Human 人 VEGF121b / VEGF-A 人细胞裂解液 (阳性对照) L-墨蝶呤L-Sepiapterin质量规格:≥98%,美国进口
大额牛皮肤成纤维样细胞;BOS-1莫特塞尼Motesanib质量规格:>99%
PA319细胞,人大肠癌细胞 人视网膜色素上皮细胞,D407细胞 人前列腺癌细胞;PC-3 [PC3]金双黄酮(标准品)Sciadopitysin质量规格:HPLC≥98%,标准品
Hep G2(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×210-羟基癸1酸,10-HDA(标准品)10-Hydroxy-2-decenoic acid质量规格:HPLC≥98%,标准品
皮肤表皮角质形成细胞和肿瘤原代细胞提取物SW620[SW-620]细胞,人结肠腺癌细胞 人肾上腺腺瘤细胞,NCI-H205细胞 原代系膜细胞培养特制添加剂Many types of cells包装:5/2.5/1ml核糖核酸酶抑制剂shēng huà shì jì容量:100克
猪源细胞D-麦芽糖 D-(+)-Maltose monohydrate,≥99% 69-79-4 50G 通用试剂
SELPLG Others Human 人 RPSGL-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 靛蓝;靛;靛;铣傻謇叮合成靛青;2,2′-双氮茚型靛 Indigo;Δ2,2′-Bipsqudoindoxyl;Indigo bluq;Indigotin;2,2′-Bisindolylin-digo;C.I. 73000 48-89-3
CM-M094小鼠胎儿表皮角质形成层细胞完全培养基100mL5-胞苷三嶙酸四钠盐溶液shēng huà shì jì容量:25克
MFI2 Others Mouse 小鼠 MFI2 / CD228 / melanoansferrin 人细胞裂解液 (阳性对照) 1186-52-3氘代乙酸-D4ACETIC-D3 ACID-D
注意事项:
1. 接收到皮肤表皮角质形成细胞和肿瘤原代细胞提取物,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。