PCR实验方法步骤：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

概述：

荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图：

荧光定量PCR服务：

简介：实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。

1、荧光定量PCR服务要求：

（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。

（02）请提供已知的全长基因序列。

（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等

2、荧光定量PCR操作程序

（01）引物（探针）设计与合成。

（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。

（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。

（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。

3、荧光定量PCR的收费标准：

  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

以下是公司正在热销产品产品：

s蚕多巴胺   英文名称：   Bombyx Dopamine   规格：   48T/96T   英文缩写：   DPA  Methyl β-D-fructofuranoside  中文名：甲基-β-D-呋喃果糖苷  分子式：C7H14O6 

菜豆凝集素elisa试剂盒   菜豆凝集素试剂盒   规格型号：96T/48T   菜豆凝集素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：菜豆凝集素试剂盒、菜豆凝集素elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  4-Chlorodehydromethyltestosterone  2446-23-3  中文名：4-氯去氢甲基睾酮  分子式：C20H27ClO2 

补体C4测定试剂盒（比浊法）                    Rifampicin  13292-46-1  中文名：利福平  分子式：C43H58N4O12 

表皮生长因子受体   英文名称：   epidermal growth factor receptor   规格：   48T/96T   英文缩写：   EGFR  3β,5α,9α-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  中文名：  分子式：C28H44O4  度：97.0%

表皮生长因子受体   英文名称：   epidermal growth factor receptor   规格：   48T/96T   英文缩写：   EGFR  3β,5α,9α-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  中文名：  分子式：C28H44O4

2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one  5751-20-2  中文名：  分子式：C5H6N2OS    组织HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次

1-(4-Fluorobenzyl)-2-chlorobenzimidazole  84946-20-3  中文名：  分子式：C14H10ClFN2    HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰质炎病毒IgG(PV-IgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Ropivacaine mesylate  854056-07-8  中文名：甲磺酸罗哌卡因  分子式：C18H30N2O4S    豚鼠白介素1β(IL1β)ELISA试剂盒 ，英文名： IL1β ELISA Kit

Manidipine dihydrochloride  89226-75-5  中文名：盐酸马尼地平  分子式：C35H40Cl2N4O6    Human cholyglycine (CG) ELISA Kit 人甘胆酸(CG)ELISA试剂盒

Quetiapine  111974-69-7  中文名：喹硫平  分子式：C21H25N3O2S    rabbitLeptin,LEPELISAKit 兔子瘦素(LEP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装细菌乙醇脱氢酶总活性比色法定量检测试剂盒20次  2-Amino-3-Formylchromone  中文名：2-氨基-3-甲酰基色原酮  分子式：C10H7NO3  度：98.0%

细菌乙醇脱氢酶总活性(NDMA)比色法定量检测试剂盒20次  2-Amino-4-chlorobenzothiazole  中文名：2-氨基-4-氯苯并噻唑  分子式：C7H5ClN2S  度：98.0%

细菌乙醇比色法定量检测试剂盒20次  2-Amino-5-mercapto-1,3,4-thiadiazole  2349-67-9  中文名：2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑  分子式：C2H3N3S2  度：98.0%   

细菌样品二维电泳裂解液用于细菌蛋白二维电泳  2-Amino-6-chloropurine  中文名：2-氨基-6-氯嘌呤  分子式：C5H4ClN5  度：98.0%

细菌样品二维电泳裂解液用于细菌蛋白二维电泳  2-Amino-6-chlorobenzothiazole  95-24-9  中文名：2-氨基-6-氯苯并噻唑  分子式：C7H5ClN2S  度：99.0%  关键词：

山羊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒厂家Benzyl L-(+)-mandelate  62173-99-3  中文名：L-(+)-扁桃酸苄酯  分子式：C15H14O3    成纤维生长因子-4   英文名称：   fibroblast growth factor 4   规格：   48T/96T   英文缩写：   FGF-4

N-Benzoyl-leucine  17966-67-5  中文名：N-苯甲酰基-亮氨酸  分子式：3    成纤维生长因子-4   英文名称：   fibroblast growth factor 4   规格：   48T/96T   英文缩写：   FGF-4

N6-Benzoyladenine  4005-49-6  中文名：N6-苯甲酰基腺嘌呤  分子式：C12H9N5O    素   英文名称：   Human Renin   规格：   48T/96T   英文缩写：   RN

Betamipron  3440-28-6  中文名：倍他米隆  分子式：C10H11NO3    视网膜母细胞瘤蛋白1   英文名称：   Human Retinoblastoma Protein 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   RBP1

6-Benzyloxypurine  57500-07-9  中文名：6-苄氧基嘌呤  分子式：C12H10N4O    松弛素-2   英文名称：   Human Relaxin-2   规格：   48T/96T   英文缩写：   RLN-2

注意事项：

山羊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒厂家1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。点击了解更公司产品。