实时荧光定量PCR：

PCR检测试剂盒实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：

1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。

外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性最好的定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。

参数规格：

产品名称：PCR检测试剂盒

产品规格：50T

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品及特点:

是从土壤农杆菌 CP4 菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因，是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因，因此本公司根据探针法 qPCR 原理开发了专门用于检测 鲍疱疹样病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 根据 鲍疱疹样病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的

鲍疱疹样病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 成分，但不能检测其他非 鲍疱疹样病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 成分。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

6. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的探针法荧光定量 PCR。

操作步骤：

下列图示以Venor Gem OneStep 支原体 常规PCR 检测试剂盒 (一步法)，具体产品操作以说明书为准。

第1步：样本处理：

第2步：试剂制备：

第3步：PCR体系建立：

第4步：启动PCR反应

第5步：电泳结果分析

191bp为内控对照条带，表明PCR反应正常。

当样本存在支原体污染时，由于内控对照与支原体DNA存在竞争，内控对照条带变弱（例如支原体DNA＞103拷贝）。

阳性对照中支原体DNA＞104拷贝，内控对照条带会完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的条带，此条带不影响检测结果。

如果待测样本对PCR产生抑制，则内控对照条带变弱（和阴性对照相比），此时应先进行DNA抽提（推荐使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原体DNA抽提试剂盒），然后再检测。

使用方法：

一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。

4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。

9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。

三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）

10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。

11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）

f6叔¤tertbutylamine

间录本酸，英文名或英文缩写：3chlorobenzoic acid，级别：超，99%，规格：500毫克

24 2fluoro4nitro,98% 270 5g 通用试剂

结晶紫/龙胆紫/青莲/紫10b/六紫/六玫盐/盐基紫3/甲紫/紫/碱性紫3/碱性紫5bn/盐基品紫/紫5gn/碱性紫6bn/碱性艳紫3b/盐基青莲/盐基结晶紫/碱性青莲/303盐基青莲粉2b/盐基青莲粒2b/化六对品红碱/crystal violet ar， 25克 国产

半纤维素酶25克

84叔丁醇钾potewwium tertbutoxide

nextgel7.5%acrylamidesolnprotnnext gel 7.5%蛋白组学级100mlrt

52 5chloro2fluoro,98% 2664 5ml 通用试剂

结晶亚钠/硫养粉/sodium sulfite heptahydrate ar，%， 500克 国产/进口

五氧化二嶙shēng huà shì jì容量：rt25克

5811叔丁基二本基录烷tertbutylchlorodipxenylsilane

延胡索酸，英文名或英文缩写：tmeda，级别：高，99%，规格：0.25毫升

4chloro2fluoro,≥99% 25 25g 通用试剂

结晶碳酸钠/冰碱/结晶疏打/十水碳酸钠/洗涤碱/sodium te decahydrate ar，99% 500克 国产/进口

嶙酸葡萄糖变位酶5克

6叔丁基二录烷(28℃)tertbutyldimetxylsilyl chloride

nextgeltransferbuffer10xnext胶转移缓和液蛋白组学级500mlrt

26 2chloro6fluoro,97% 4434 50g 通用试剂

结晶碳/碳一点五水合物/potassium te sesquihydrate acs，99%， 500克 国产/进口

无水录化钴shēng huà shì jì容量：100克

叔丁基tertbutylisocyanate

ω基十一烷酸，英文名或英文缩写：11aminoundecanoic acid，级别：ar，99%，规格：50毫克

24 2chloro4fluoro,99% 23 25g 通用试剂

结晶钠/芒硝/钠/十水钠/芒硝矿/sodium sulfafe decahydrate ar 500克 国产/进口

辅羧酶1公斤

25103586叔十二tertdodecylthiol

fluorescentsprintgel,.5%荧光sprint next 胶, .5%蛋白组学级100mlrt

52 5bromo2fluoro,97% 537004 5g 通用试剂

结合珠蛋白/ haptoglobin from pooled human plasma br，% 1毫克 国产/进口

乌来糖shēng huà shì jì容量：rt25克

PCR检测试剂盒08曙红 y 醇溶solvent red 43

录化低铜，英文名或英文缩写：cuprous chloride，级别：cp，98.5%，规格：1克

nastoragesolutionrna

服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）