PCR实验方法步骤：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

概述：

荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

产品:elisa 试剂盒方法

产品规格：50T

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图：

荧光定量PCR服务：

elisa 试剂盒方法简介：实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。

1、荧光定量PCR服务要求：

（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。

（02）请提供已知的全长基因序列。

（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等

2、荧光定量PCR操作程序

（01）引物（探针）设计与合成。

（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。

（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。

（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。

3、荧光定量PCR的收费标准：

  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

以下是公司正在热销产品产品：

f2,3二 2,3difluoro,97% 287 1g 通用试剂

钾/二钾半水合物/ potassium tartrate hemihydrate ar，99% 500克 国产/进口

三shēng huà shì jì容量：1克

0正十一烷nundecane;alkane c11 

β甘油嶙酸钠水合物，英文名或英文缩写：bgp，级别：fmp，规格：25克

 4fluoro2nitro,98% 4106 5g 通用试剂

铵/2,3二r(r*,r*)丁二酸二铵盐/ammonium tartrate ar，99% 500克 国产/进口

cbzl缬酸100克

436十一醇10undecen1ol

tween80吐温80蛋白组学级100ml90056rt

(... 1bromo2(trifluoromethoxy)benzene,97% 6484 1g 通用试剂

酒石黄/黄/食用柠檬黄/酸性黄23/1(4磺酸)4(4磺酸偶氮)5吡唑啉酮3羧酸三钠盐/食用色素黄色5号/他特秦/ tartr bs，% 5/25/100/500克 国产/进口

烟酸测定培养基shēng huà shì jì容量：50张/盒

9十一酸undecenoic acid

乙二四锌二钠，英文名或英文缩写：diwo7ium zinc etxylenediaminetetraacetate tetrahydrate，级别：br，98%，规格：100克

43 4fluoro3nitro,98% 41 5g 通用试剂

九聚乙二醇单癸醚/c10e9 超 1克 国产/进口

l缬醇100克

444品红粉carbol fuchsin

imidazole咪唑蛋白组学级100g288324rt

2,3,4三 2,3,4trifluoro,99% 335 500mg 通用试剂

井冈霉素/有效霉素/n(1s)(1,4,6/5)3羟4,5,6三2环已基oβd葡萄糖基(1→3)1s(1,2,4/3,5)2,3,4三5羟环已基胺/validamycin usp级 250毫克 国产/进口

丫啶黄素shēng huà shì jì容量：保存：20℃100u

1000℃na

n，n二基亚，英文名或英文缩写：dcci，级别：ar，99%，规格：1克

34 3fluoro4nitro,99% 4344 1g 通用试剂

精胺/o,o二0酰胺/精碱/精素/n,n′双(3基丙基)1,4丁/α,δ双(γ丙基)丁烷/1,二基4,9二氮十二烷/spermine 生物技术级，97%， 1/5克 sigmas3256

cbzl本25克

8032324;石油精petroleum ;petroleum spirit;benzin;naphtha

temed四乙二安蛋白组学级100ml1109rt

26 2fluoro6nitro,98% 08 1g 通用试剂

 bitartrate monohydrate

注意事项：

elisa 试剂盒方法1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。点击了解更公司产品。