PCR实验方法步骤：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

概述：

荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图：

荧光定量PCR服务：

简介：实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。

1、荧光定量PCR服务要求：

（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。

（02）请提供已知的全长基因序列。

（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等

2、荧光定量PCR操作程序

（01）引物（探针）设计与合成。

（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。

（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。

（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。

3、荧光定量PCR的收费标准：

  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

以下是公司正在热销产品产品：

f小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Fumaric acid  中文名：  分子式：C4H4O4 

小鼠α半乳糖基抗体(Gal)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Bis(4-bromophenyl)acetylene  2789-89-1  中文名：二(4-溴苯基)乙炔  分子式：C14H8Br2  度：98.0%   

小鼠αN已酰基葡糖苷酶elisa试剂盒   小鼠αN已酰基葡糖苷酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠αN已酰基葡糖苷酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠αN已酰基葡糖苷酶试剂盒、小鼠αN已酰基葡糖苷酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Bis(4-bromophenyl)amine  16292-17-4  中文名：双(4-溴苯基)胺  分子式：C12H9Br2N 

小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Bis(4-bromophenyl)acetylene  2789-89-1  中文名：二(4-溴苯基)乙炔  分子式：C14H8Br2 

小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Bindone  中文名：双茚二酮  分子式：C18H10O3

Axitinib  中文名：阿西替尼  分子式：C22H18N4OS  度：98.0%  兔子前列腺素E2elisa试剂盒   兔子前列腺素E2试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子前列腺素E2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子前列腺素E2试剂盒、兔子前列腺素E2 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

Escitalopram oxalate  中文名：草酸西酞普兰  分子式：C22H23FN2O5  度：99.0%  小鼠叠氮胸苷(AZT)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Deferasirox  中文名：地拉罗司  分子式：C21H15N3O4  度：99.0%  小鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Ilaprazole  中文名：艾普拉唑  分子式：C19H18N4O2S  度：98.0%  小鼠凋亡抑制基因（Bcl-2）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Ivermectin B1a  中文名：依维菌素  分子式：C48H74O14  度：98.0%  小鼠凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Neridienone B  中文名：  分子式：C21H28O4  度：95.0%

小鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Nevirapine  129618-40-2  中文名：奈伟拉平  分子式：C15H14N4O 

小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Mitiglinide calcium  145525-41-3  中文名：米格列奈钙  分子式：C19H25NO3 

小鼠组蛋白elisa试剂盒   小鼠组蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠组蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠组蛋白试剂盒、小鼠组蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Neoprzewaquinone A  中文名：  分子式：C36H28O6  度：98.5%

小鼠组胺elisa试剂盒   小鼠组胺试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠组胺试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠组胺试剂盒、小鼠组胺elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Neochlorogenic acid methyl ester  中文名：新绿原酸甲酯  分子式：C17H20O9  度：97.5%

奥斯特奥斯特线虫探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Methyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C22H17N3O4  度：98.0%  小鼠肺表面活性物质相关蛋白A   英文名称：   Mouse Pulmonary surfacta associated protein type A   规格：   48T/96T   英文缩写：   SP-A

Ethyl2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C14H18N2O6  度：98.0%  小鼠肺表面活性物质相关蛋白D   英文名称：   Mouse Pulmonary surfacta associated protein type D   规格：   48T/96T   英文缩写：   SP-D

Trenbolone cyclohexylmethylcarbonate  中文名：群勃龙环己甲基碳酸酯  分子式：C26H34O4  度：98.0%  小鼠S100钙结合蛋白A7   英文名称：   Mouse S100 Calcium Binding Protein A7   规格：   48T/96T   英文缩写：   S100A7

Ceftiofur hydrochloride  中文名：头孢噻呋盐酸盐  分子式：C19H18ClN5O7S3  度：98.0%  小鼠N-乙酰基-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯酸(AcSDKP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Cefquinome  中文名：头孢喹咪  分子式：C23H24N6O5S2  度：98.0%  小鼠N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

奥斯特奥斯特线虫探针法荧光定量PCR试剂盒说明书1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。点击了解更公司产品。