PCR实验方法步骤：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

概述：

荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图：

荧光定量PCR服务：

简介：实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。

1、荧光定量PCR服务要求：

（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。

（02）请提供已知的全长基因序列。

（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等

2、荧光定量PCR操作程序

（01）引物（探针）设计与合成。

（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。

（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。

（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。

3、荧光定量PCR的收费标准：

  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

以下是公司正在热销产品产品：

f小鼠白介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Carvedilol  中文名：卡维地洛  分子式：C24H26N2O4  度：98.0%

小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Carbasalate calcium  5749-67-7  中文名：卡巴匹林钙  分子式：C19H18CaN2O9  度：98.0%  关键词： 

小鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Carvedilol  中文名：卡维地洛  分子式：C24H26N2O4 

小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate  921769-65-5  中文名：卡培他滨  分子式：C16H20FN3O7  度：98.0%   

小鼠白介素1β(IL-1β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Candesartan  139481-59-7  中文名：坎地沙坦  分子式：C24H20N6O3

16-Acetoxy-7-O-acetylhorminone  269742-39-4  中文名：  分子式：C24H32O7  度：98.0%  关键词：    小鼠骨保护素配体elisa试剂盒   小鼠骨保护素配体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠骨保护素配体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠骨保护素配体试剂盒、小鼠骨保护素配体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

15,16-Dihydroxyoctadeca-9Z,12Z-dienoic acid  140129-22-2  中文名：  分子式：C18H32O4  度：%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠谷酸脱羧酶自身抗体elisa试剂盒   小鼠谷酸脱羧酶自身抗体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠谷酸脱羧酶自身抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠谷酸脱羧酶自身抗体试剂盒、小鼠谷酸脱羧酶自身抗体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

14β,16β-Dihydroxy-3β-(β-D-glucopyranosyloxy)-5α-bufa-20,22-dienolide  1323952-04-0  中文名：  分子式：C30H44O10  度：98.0%  关键词：  强心剂; 强心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

12-Hydroxyjasmonic acid  140631-27-2  中文名：12-羟基酸  分子式：C12H18O4  度：95.5%  关键词：  中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

12-Aminolauric acid  693-57-2  中文名：12-氨基十二酸  分子式：C12H25NO2  度：98.0%      小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装血糖含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样  Pemetrexed disodium  中文名：培美曲塞二钠  分子式：C21H23N5Na2O6  度：98.0%

血栓调节蛋白 (Thrombomodulin/sCD141)   作用：   ELISA   规格：   96T   法国 Diaclone  Rosuvastain Calcium  中文名：瑞舒伐他汀钙  分子式：C22H28FN3O6S 

血栓素B2   英文名称：   Thromboxane B2   规格：   48T/96T   英文缩写：   TXB2  Pemetrexed  中文名：培美曲塞二钠  分子式：C20H21N5O6  度：98.0%

血栓素B2   英文名称：   Human Thromboxanes B2   规格：   48T/96T   英文缩写：   TXB2  Pefloxacin mesylate  70458-95-6  中文名：甲磺酸培氟沙星  分子式：C18H24FN3O6S  度：98.0%   

血栓素B2   英文名称：   Human Thromboxane B2   规格：   48T/96T   英文缩写：   TXB2  Pefloxacin mesylate  中文名：甲磺酸培氟沙星  分子式：C18H24FN3O6S

肉色诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒厂家Myricadenin A  中文名：  分子式：C39H40O17  度：97.5%  兔子皮质醇(Coisol)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Loroglossin  中文名：  分子式：C34H46O18  度：97.0%  兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose  中文名：6-O-对羟基苯甲酰葡萄糖  分子式：C13H16O8  度：98.0%  兔子凝血酶受体()ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        

Cerebroside D  中文名：脑苷脂D  分子式：C43H81NO9  度：96.5%  兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Ethyl chlorogenate  中文名：绿原酸乙酯  分子式：C18H22O9  度：96.0%  兔子C反应蛋白(CRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

肉色诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒厂家1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。点击了解更公司产品。