PCR实验方法步骤：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

概述：

荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图：

荧光定量PCR服务：

简介：实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。

1、荧光定量PCR服务要求：

（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。

（02）请提供已知的全长基因序列。

（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等

2、荧光定量PCR操作程序

（01）引物（探针）设计与合成。

（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。

（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。

（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。

3、荧光定量PCR的收费标准：

  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

以下是公司正在热销产品产品：

fCynatratoside A  中文名：白薇苷A  分子式：C28H40O8    猪内皮细胞粘附分子1elisa试剂盒   猪内皮细胞粘附分子1试剂盒   规格型号：96T/48T  

Cynanoside F  中文名：  分子式：C41H62O15    猪内皮生长因子elisa试剂盒   猪内皮生长因子试剂盒   规格型号：96T/48T 

Cyclopropyl 2-fluorobenzyl ketone  中文名：  分子式：C11H11FO    猪生成素受体/含球蛋白样环和上皮生长因子样域酪酸激酶2(Tie-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Cyasterone  中文名：杯苋甾酮  分子式：C29H44O8    猪生成素1(ANG-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

CTU Guanamine  中文名：  分子式：C17H26N10O4    猪乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

脂肪型脂肪酸结合蛋白   英文名称：   fatty acid-binding protein   规格：   48T/96T   英文缩写：   FABP4  Venlafaxine  中文名：文拉法辛  分子式：C17H27NO2  度：98.0%

脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白   英文名称：   Adipocyte Fatty Acid Binding Protein   英文缩写：   a FABP   规格：   48T/96T  Valsartan  中文名：缬沙坦  分子式：C24H29N5O3 

脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白   英文名称：   Adipocyte Fatty Acid Binding Protein   规格：   48T/96T   英文缩写：   a FABP  Odoroside H  18810-25-8  中文名：  分子式：C30H46O8  度：98.5%  关键词：  夹竹桃; 强心苷; 甾苷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

脂肪细胞刺激因子 (LSP)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     3-Amino-2,6-piperidinedione hydrochloride  中文名：  分子式：C5H9ClN2O2 

脂肪酸合成酶（FAS）测试

PCR检测试剂盒乳酸脱氢酶（LDH）测试盒   Lactate dehydrogenase (LDH) test kit  3-Acetylcoumarin  中文名：3-乙酰基香豆素  分子式：C11H8O3  度：99.0%

乳酸（LD）测试盒（测血清、组织等）   Lactic acid (LD) test case (serum, tissue, etc.)  3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione  55604-88-1  中文名：  分子式：C8H8O4 

乳酸（LD）测试盒（测全血）   Lactic acid (LD) test case (whole blood)  3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione  55604-88-1  中文名：  分子式：C8H8O4  度：%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库

乳酸（LD）（血清、组织）检测   Lactic acid (LD) (whole blood) detection  3-Acetylcoumarin  3949-36-8  中文名：3-乙酰基香豆素  分子式：C11H8O3  度：99.0%  关键词： 

乳酸（LD）（全血）检测   Lactate dehydrogenase (LDH) detection  3-Acetylcoumarin  3949-36-8  中文名：3-乙酰基香豆素  分子式：C11H8O3盒   紫外分光光度法   50管/48样  Venlafaxine hydrochloride  中文名：盐酸文拉法辛  分子式：C17H28ClNO2  度：98.0%

Fosaprepitant dimeglumine  265121-04-8  中文名：  分子式：C30H40F7N6O10P    兔骨保护素elisa试剂盒   兔骨保护素试剂盒   规格型号：96T/48T   兔骨保护素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔骨保护素试剂盒、兔骨保护素elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Pazopanib  444731-52-6  中文名：帕唑帕尼  分子式：C21H23N7O2S    兔钩端螺旋体IgGelisa试剂盒   兔钩端螺旋体IgG试剂盒   规格型号：96T/48T   兔钩端螺旋体IgG试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔钩端螺旋体IgG试剂盒、兔钩端螺旋体IgG elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate  921769-65-5  中文名：卡培他滨  分子式：C16H20FN3O7    兔分泌型球蛋白Aelisa试剂盒   兔分泌型球蛋白A试剂盒   规格型号：96T/48T   兔分泌型球蛋白A试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔分泌型球蛋白A试剂盒、兔分泌型球蛋白A elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

Irbesartan  138402-11-6  中文名：厄贝沙坦  分子式：C25H28N6O    兔骨桥素(OPN)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Isoniazid  54-85-3  中文名：异  分子式：C6H7N3O    兔钩端螺旋体IgG(Lebtospira)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

PCR检测试剂盒1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。点击了解更公司产品。