PCR实验方法步骤：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

概述：

荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图：

荧光定量PCR服务：

简介：实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。

1、荧光定量PCR服务要求：

（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。

（02）请提供已知的全长基因序列。

（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等

2、荧光定量PCR操作程序

（01）引物（探针）设计与合成。

（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。

（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。

（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。

3、荧光定量PCR的收费标准：

  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

以下是公司正在热销产品产品：

fDiosgenin  512-04-9  中文名：薯蓣皂苷元  分子式：C27H42O3  度：98.0%  关键词：  抗炎; 雌激素剂; 黄山药; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠17羟孕(17-OHP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Dioscin  19057-60-4  中文名：薯蓣皂苷  分子式：C45H72O16  度：98.5%  关键词：  溶血; 细胞毒; 抗真菌; 薯蓣属; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠乳酸脱氢酶   英文名称：   Mouse Lactate Dehydrogenase   规格：   48T/96T   英文缩写：   LDH

Dinitolmide  148-01-6  中文名：二硝托胺  分子式：C8H7N3O5  度：98.0%      小鼠白三烯C4   英文名称：   Mouse Leukoiene C4   规格：   48T/96T   英文缩写：   LTC4

Dimetridazole  551-92-8  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2  度：99.0%      小鼠脂蛋白酯酶   英文名称：   Mouse Lipopeinlipase   规格：   48T/96T   英文缩写：   LPL

Dimethylolurea  140-95-4  中文名：双羟甲脲  分子式：C3H8N2O3  度：98.0%      小鼠白三烯   英文名称：   Mouse leukoiene   规格：   48T/96T   英文缩写：   LT3

小鼠抗单链DNA抗体/变性DNA抗体(ssDNA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Nandrolone undecylate  862-89-5  中文名：十一酸诺龙  分子式：C29H46O3  度：98.0%  关键词： 

小鼠抗单链DNA抗体/变性DNA抗体(ssDNA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Epirengynic acid  中文名：  分子式：C8H14O4  度：98.0%

小鼠抗单核细胞抗体elisa试剂盒   小鼠抗单核细胞抗体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠抗单核细胞抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠抗单核细胞抗体试剂盒、小鼠抗单核细胞抗体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Epigoitrin  中文名：表告依春  分子式：C5H7NOS  度：98.5%

小鼠抗单核细胞抗体(AMA)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Epiandrosterone  中文名：表雄酮  分子式：C19H30O2  度：98.0%

小鼠抗单核细胞抗体(AMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Estradiol  50-28-2  中文名：雌二醇  分子式：C18H24O2Stigmasterol glucoside  19716-26-8  中文名：  分子式：C35H58O6    组织PKC激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Stigmastane-3,6-diol  112244-29-8  中文名：  分子式：C29H52O2    HumanparamyxovirusparotitisIgGELISAKit人腮腺炎病毒IgGELISA试剂盒规格：96T/48T

17α-Thevebioside  114613-59-1  中文名：  分子式：C36H56O13    兔子基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

α-Spinasterol acetate  4651-46-1  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2    Human thymosin alpha 1 (Thymosin alpha 1) ELISA Kit 人胸腺肽α1(Thymosin α1)ELISA试剂盒

α-Spinasterol glucoside  1745-36-4  中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6    Human28SribosomeRNPaibody,28SrRNPELISAKit 人28S抗核糖体抗体(28SrRNP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

博兹曼荧光杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒厂家Sibiricose A1  139726-40-2  中文名：6'-芥子酰基蔗糖  分子式：C23H32O15    HumanDehydroepiandrosterone,DHEAELISA试剂盒人脱氢表雄同(DHEA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Ethyl 13-hydroxy-α-linolenate  123435-84-7  中文名：  分子式：C20H34O3    组织JNK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

(-)-Phaselic acid  423170-79-0  中文名：  分子式：C13H12O8    HumanplasmaaicoagulaproteinC,PCELISAKit人血浆抗凝蛋白C(PC)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Ethyl (9Z,11E)-13-hydroxyoctadeca-9,11-dienoate  947529-92-2  中文名：  分子式：C20H36O3    兔子纤溶酶/纤维蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

6,6'-Di-O-sinapoylsucrose  1068661-35-7  中文名：6,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19    Rat heme oxygenase 1 (HO-1) ELISA Kit 大鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒

注意事项：

博兹曼荧光杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒厂家1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。点击了解更公司产品。