G&VS10010.1 v.A

细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过细胞内表达的外源性细菌β-半乳糖苷酶的催化所生成的深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞，藉此建立一种简单的目测颜色来识别报告基因阳性细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。其适用于转基因后的人体和动物细胞。产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感。

技术背 

大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（ß-galactosidase；ß-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。X-Gal （5-bromo-4-chloro-3-indoyl- ß-D-Galacto pyranoside）是生物化学中常用的一种有机物，β-半乳糖苷酶可以将X-Gal转化为蓝色的产物，由此用它作为生色底物，来建立一种简单的目测颜色来确定细胞β-半乳糖苷酶的活性，从而通过光学显微镜鉴别转染细胞报告基因的存在与否和强弱表现。

产品内容

清理液（Reagent A）   毫升

固定液（Reagent B）  毫升

稀释液（Reagent C）  毫升

染色液（Reagent D）  毫升

产品说明书  1份

保存方式

保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent C）和染色液（Reagent D），用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月

用户自备

2毫升离心管：用于配制染色工作液

15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液

恒温培养箱：用于染色孵育

光学显微镜：观察染色后的组织细胞

实验步骤

操作一、25cm²细胞培养瓶染色

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent D）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent C）到2毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent D），混匀后，置入暗室里，室温下，标记为染色工作液。然后进行下列操作：

1． 小心抽去25cm²细胞培养瓶里的培养液

2． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3． 小心抽去清理液

4． 小心加入xx毫升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5． 在室温下孵育5分钟

6． 小心抽去固定液

7． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗细胞表面

8． 小心抽去清理液

9． 重复实验步骤7和8一次

10． 小心加入xx毫升染色工作液，覆盖整个细胞表面

11． 放进37℃培养箱，孵育3小时至24小时，或直至细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）

12． 在光学显微镜下观察和计数：表达β- 半乳糖苷酶活性的细胞为阳性细胞，呈现蓝色

13． （选择步骤）核固红复染：细胞核呈现粉红色（建议使用核固红复染试剂盒――G&VS40011）

操作二、24孔细胞培养板染色

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent D）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent C）到15毫升锥形离心管，加入xx微升染色液（Reagent D），混匀后，置入暗室里，室温下，标记为染色工作液。然后进行下列操作：

1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液

4．每孔加入xx微升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5．在室温下孵育5分钟

6．小心抽去固定液

7．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面

8．小心抽去清理液

9．重复实验步骤7和8一次

10．每孔加入xx微升染色工作液，覆盖整个细胞表面

11．放进37℃培养箱，孵育3小时至24小时，或直至细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）

14． 在光学显微镜下观察和计数：表达β- 半乳糖苷酶活性的细胞为阳性细胞，呈现蓝色

15． （选择步骤）核固红复染：细胞核呈现粉红色（建议使用核固红复染试剂盒――G&VS40011）

注意事项

1． 本产品为100次（4个24孔板）或20次（20个25cm²细胞培养瓶）操作

2． 操作时须戴手套

3． 建议使用核内表达的载体代替胞内表达的载体转染或感染细胞为佳

4． 本产品的参数：固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到最优化

5． 染色工作液避免光照

6． 用户根据实际需求，按比例配制试剂用量

7． 染色时，培养箱为一般培养箱，没有二氧化碳，以防影响pH

8． 染色孵育过程，避免光照

9． 细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3小时即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24小时

10． 细胞染色最长孵育时间为24小时

11． 孵育时避免液体蒸发

12． 染色后的细胞样品可以在4℃冰箱里长期保存，同样须避免光照

13． 细胞质呈现蓝色为酶活性表达或报告基因阳性

14． 本公司提供系列β-半乳糖苷酶检测试剂产品 

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定着色清晰

使用承诺

极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号 名称 规格

G&VS10010.1 细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 100次

G&VS10010.1A 清理液（Reagent A）   毫升

G&VS10010.1B 固定液（Reagent B） 毫升

G&VS10010.1C 稀释液（Reagent C） 毫升

G&VS10010.1D 染色液（Reagent D） 毫升

G&VS40011 核固红复染试剂盒 50次

试剂盒订购信息

上海极威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，是一家专业从事“产品研发、市场销售、技术服务”为一体的高科技生物技术公司。公司主营产品有elisa试剂盒，小鼠elisa试剂盒，大鼠elisa试剂盒，植物elisa试剂盒，食品安全系列试剂盒，糖尿病系列试剂盒，细胞因子系列试剂盒，血浆相关指标elisa试剂盒，一步法试剂盒，生化试剂盒，标准品，细胞株，生化试剂，技术服务（生化测试、液相气相检测、ICP-MS测试），在科学研究和医疗检测领域享有良好的声誉，经过多年的努力发展已成为专业供应各类生物科研用品的公司，长期专注于生物领域，旗下产品种类众多。