基本信息：
产品名称：转氢酶1微量法检测试剂盒
测试方法: 微量法
规格 : 100管/96样
货号：GOY-01S6565
分类：氧化磷酸化系列
测定意义：
TH位于线粒体的内膜上，又称为线粒体复合体六，催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互转化，调节线粒体NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反应称为TH-2，催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。

测定原理：

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代NAD+，TH-2催化APAD+还原生成APADH，APADH在375nm有特征光吸收，测定375nm光吸收的增加速率，来计算TH-2活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1支（EP管中），2 μmol/mL酚标准液，4℃保存。
测定步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。
4. 标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。
5. 对照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸馏水，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。
6. 测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。
其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。
注意：空白管和标准管只需测定一次。产品仅用于科研
小鼠V-Ets骨髓成红细胞增多症病毒E26癌基因同源物1(ETS1)ELISA试剂盒 ，英文名： ETS1 ELISA Kit

人血栓素A2(TX-A2)ELISA检测试剂盒HumahromboxaneA2,TX-A2ELISAKit 96T/48T

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英文名称RatCCL1ELISAKit大鼠CCL1规格：96T/48T

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ELISAKitF1+2人凝血酶原片段F1+2规格：48T/96T
小鼠组织因子(TF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human ai glomerular baseme membrane aibody (GBM) ELISA Kit 人抗肾小球基底膜抗体(GBM)ELISA试剂盒

Humanhydroxyproline,HypELISAKit 人羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACH(Humanacetylcholine)ELISAKit人乙酰胆碱规格：48T/96T

药品阿斯巴塘(aspaame)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次

Mousephosphatidylserine,PSELISAKit小鼠0脂酰丝氨酸(PS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Anti-Ankyrin G/ANK-3/ankyrin 3/FITC 荧光素标记锚定蛋白G抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-FANCF/FITC 荧光素标记范可尼贫血相关蛋白F抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh COPS7A 信号转导蛋白亚基7A抗体 规格 0.2ml

Adiponectin 脂联素(多肽抗原) 0.5mg

KRV-VP1 + KRV-VP2 (C-terminus) 英文名称： 基尔曼氏细小病毒VP1/VP2抗体(大鼠潜在病毒KRV)C端 1ml

Rhesus antibody Rh Tyrosinase 酪氨酸酶抗体 规格 0.1ml

Anti-FANCF/FITC 荧光素标记范可尼贫血相关蛋白F抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
转氢酶1微量法检测试剂盒Anti-V.cholera Ogawa/FITC 荧光素标记01群小川型霍乱弧菌抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

CD40L(CD40 Ligand/TNFSF5/CD154) CD40L抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

细胞周期相关激酶抗体 Anti-CCRK 0.1ml

Smad1 英文名称： 细胞信号转导分子Smad-1抗体 0.1ml

EDG8 英文名称： 内皮细胞分化G蛋白偶联受体8抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-HDAC7 (Ser318) 0酸化组蛋白去乙酰化酶7抗体 规格 0.1ml

CD40L(CD40 Ligand/TNFSF5/CD154) CD40L抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg
操作步骤：
1. 样品的准备：
a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。
b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素钠) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。
d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P1511）测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。
e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。
2. 试剂盒的准备工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。
注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。
b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。
c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。
3. 样品测定：
a. 参考下表使用96孔板加入各个组分，注意设置样品孔和各种空白对照孔。
注意：加入反应启动工作液后反应即会开始，可以在低温操作或用排枪操作以减小各孔间因加入反应启动工作液的时间先后差异而导致的误差。
b. 37℃孵育30分钟。
说明：孵育25至35分钟检测出来的SOD活力无显著差异，但为保证检测结果的一致性，推荐孵育30分钟。
c. 450nm 测定吸光度。如无450nm 滤光片，可以使用420-480nm 的滤光片。也可以使用大于600nm 的波长作为参考波长进行双波长测定。
4. 样品中总SOD活力的计算：
a. 抑制百分率的计算：
参考如下计算公式计算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白对照1－A空白对照2)－(A样品－A空白对照3)] / (A空白对照1－A空白对照2) × 100%
如果没有设置空白对照3，则可以把计算公式简化为：
抑制百分率＝(A空白对照1－A样品) / (A空白对照1－A空白对照2) × 100%
如果计算出来的抑制百分率小于30% 或大于70% ，则通常需要把该样品重新测定。尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度较高的待测样品。
b. SOD酶活力单位的定义：在上述化酶藕联反应体系中抑制百分率为50% 时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位 (unit)。注意：SOD的活力单位的定义方式有很多种，不同的活力单位需根据其定义的不同进行适当换算。