基本信息：
产品名称：食品中亚硝酸盐含量微量法检测试剂盒
测试方法: 微量法
规格 : 100管/96样
货号：GOY-01S6492
分类：氮代谢系列
测定意义：
在食品中，亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更安定，在食品加工业中作为保色剂，以维持肉制品的良好外观，并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生，提高食用肉制品的安全，但是人体长期摄入亚硝酸盐过量的食品，可诱发消化系统癌变。

测定原理：

在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵或匀浆器、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1支（EP管中），2 μmol/mL酚标准液，4℃保存。
测定步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。
4. 标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。
5. 对照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸馏水，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。
6. 测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。
其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。
注意：空白管和标准管只需测定一次。产品仅用于科研
小鼠白介素23(IL-23)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-23 ELISA Kit

大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA检测试剂盒Rat1,3-βDglucosidaseELISAKit 96T/48T

人Toll样受体2(TLR2)免疫试剂盒 human TLR2 ELISA Kit

英文名称MouseHCGELISAKit小鼠绒毛促性腺激素(HCG)规格：96T/48T

AIL蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次

rabbitNervegrowthfactor,NGFELISA试剂盒兔子神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
猪血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human myosin light chain kinase (MLCK) ELISA Kit 人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)ELISA试剂盒

RabbitIerleukin9,IL-9ELISAKit 兔子白介素9(IL-9)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforai-RV(Humanai-rabiesvirusaibody)ELISAKit人抗狂犬病毒抗体规格：48T/96T

血液3-羟-3-甲戊二酰辅酶A(HMG-COA)合成酶活性比色法定量检测试剂盒20次

Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit猪胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒规格：96T/48T
GnRHR ELISA Kit 大鼠促性腺激素释放激素受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Tau protein 微管相关蛋白抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-Chicken IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的羊抗鸡IgG 规格 0.1ml

ACA-IgM ELISA Kit 大鼠抗心0脂抗体IgM 96T

NR2E1 英文名称： 核受体蛋白NR2E1抗体 0.2ml

Blood Group Antigen Precursor 英文名称： 血型抗原前体蛋白抗体 0.2ml

Anti-Tau protein 微管相关蛋白抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml
食品中亚硝酸盐含量微量法检测试剂盒Anti-AFP/HRP 辣根过氧化物酶标记鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体(检测)IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Nadrin peptide 发育调节蛋白多肽抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

APP淀粉样肽前体蛋白抗体 Anti-APP/Amyloid beta A4 0.1ml

phospho-ZCWCC1 (Ser739) 英文名称： 0酸化ZCWCC1抗体 0.1ml

DSPP 英文名称： 牙本质0蛋白抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-eNOS(Thr495) 0酸化合成酶3抗体(内皮型) 规格 0.1ml

Nadrin peptide 发育调节蛋白多肽抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg
操作步骤：
1. 样品的准备：
a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。
b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素钠) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。
d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P1511）测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。
e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。
2. 试剂盒的准备工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。
注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。
b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。
c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。
3. 样品测定：
a. 参考下表使用96孔板加入各个组分，注意设置样品孔和各种空白对照孔。
注意：加入反应启动工作液后反应即会开始，可以在低温操作或用排枪操作以减小各孔间因加入反应启动工作液的时间先后差异而导致的误差。
b. 37℃孵育30分钟。
说明：孵育25至35分钟检测出来的SOD活力无显著差异，但为保证检测结果的一致性，推荐孵育30分钟。
c. 450nm 测定吸光度。如无450nm 滤光片，可以使用420-480nm 的滤光片。也可以使用大于600nm 的波长作为参考波长进行双波长测定。
4. 样品中总SOD活力的计算：
a. 抑制百分率的计算：
参考如下计算公式计算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白对照1－A空白对照2)－(A样品－A空白对照3)] / (A空白对照1－A空白对照2) × 100%
如果没有设置空白对照3，则可以把计算公式简化为：
抑制百分率＝(A空白对照1－A样品) / (A空白对照1－A空白对照2) × 100%
如果计算出来的抑制百分率小于30% 或大于70% ，则通常需要把该样品重新测定。尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度较高的待测样品。
b. SOD酶活力单位的定义：在上述化酶藕联反应体系中抑制百分率为50% 时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位 (unit)。注意：SOD的活力单位的定义方式有很多种，不同的活力单位需根据其定义的不同进行适当换算。