应激宁，批号：20210125。由武汉华扬动物药业有限责任公司提供；羧甲基纤维素钠，国药试剂。

清洁级ICR小鼠，雌雄各半，体重18～22g，购于扬州大学比较医学中心，动物生产许可证号：SCXK（苏）2012-0004，使用许可证号：SYXK（苏）2012-0029。小鼠饲料由该中心提供，自由采食和饮水，试验前在实验动物房适应3天，试验给药前停食12 h，不限制饮水。

6周龄清洁级Wistar大鼠80只，雌雄各半，体重公鼠在130~150g之间，母鼠在120~140g之间，由扬州大学比较医学中心提供。动物生产许可证号：SCXK（苏）2012-0004，使用许可证号：SYXK（苏）2012-0029。

精确称取试药12.5g，加入0.5%羧甲基纤维素钠溶液50ml，配制成0.25g/ml的混悬液备用。

1.4.1 方法

取8只小鼠（雌、雄各半）分为两组，每组4只，每组设2个重复，禁食12h 后，取上述混悬药液，灌胃给药1次，灌胃给药体积2ml/100g（相当于原生药5000mg/Kg）。给药后4 h内连续观察，之后每天上午和下午分别由试验人员肉眼各观察1次，连续观察7 d。

1.4.2 评价指标

小鼠存活率，精神状况、采食量、饮水量、排便。

按照农业部兽药评审中心《兽药研究技术指导原则汇编》之兽药急性毒性试验指导原则精神，将动物数增至10只，并重复2次试验。即又取20只小鼠（雌雄各半），再次进行灌胃给药1次，灌胃给药体积2ml/100g，给药后4h内连续观察，之后每天上下午各观察1次，连续观察7d，结果小鼠全部存活，即受试药物应激宁的LD50大于5000mg/Kg，提示该受试物毒性很低，依据《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》（国家食品药品监督管理局编．中药、天然药物急性毒性试验技术指导原则GPT2-1[S]．2005．）改用最大耐受量给药试验。

1.5.1 方法

ICR小鼠40只，随机分成2组，即阴性对照组和染毒组（试验组），每组20只，雌雄各半，试验前禁食不禁水12h。染毒组小鼠按2ml/100g BW灌胃试药混悬液，间隔3h后重复灌胃给予等体积试药；阴性对照组灌胃给予等容积0.5%羧甲基纤维素钠溶液，给药后4h 内连续观察，之后每天上午和下午分别由试验人员肉眼各观察1次，连续观察7d。

1.5.2 评价指标

观察动物精神状态、毛色、自主活动、呼吸、饮食、二便、口鼻分泌物等一般状态，并详细记录动物的中毒表现和特点，毒性反应出现和消失的时间、死亡时间，观察期结束后将所有存活小鼠脱臼处死，进行眼观病理学检查。

1.6.1 给药剂量及分组

将80只Wistar大鼠随机分为4组，分别为应激宁高、中、低剂量组和空白对照组，每组20只，雌雄各半。组内动物个体体重相差应不超过平均体重的20%，组间平均体重相差不超过5%。

由于急毒试验没有测出LD50，90天喂养试验的高剂量组按最大耐受剂量10g/kg，混饲给药，分为低，中，高剂量组及对照组。给药各组剂量分别定为：0.0g/kgBW，2.5g/kgBW，5.0g/kgBW，10g/kgBW，连续给药90天。

1.6.2 检测项目与方法

服药期间每天肉眼观察大鼠的一般行为（包括精神状态，行为活动，采食量，饮水量，毛色，对外反应，粪便等）、中毒及死亡情况；同时记录饮水量、采食量，并按周测量大鼠体重，投入饲料量和剩余饲料量。并计算平均摄食量、增重。将染毒剂量组与对照组加以比较和统计学处理，及时记录和分析大鼠的中毒症状及出现各症状的先后次序、时间。