单细胞裂解液（DNA实验用）

产品及特点单细胞裂解液（DNA 专用）是单细胞 DNA 提取专用裂解液，产品经过多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于测序和RT-PCR 等试验。本产品足够使用 200 次以上。
规格及成分 成 份 编 号 热封袋包装
单细胞裂解液（DNA 型） 130803 1 mL
使用手册 130803sc 1 份

运输及保存 低温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂 PBS 溶液

使用方法 如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备，此处所列步骤仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球（2-8 细胞胚胎）等材料，对其他材料（如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等），用户需自行选用合适的方法制备单细胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如 FACS 分离细胞、卵细胞等），则可以跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤：

一、用培养细胞或实体组织制备单细胞：

1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基中。

2. 按常规方法对细胞进行计数。

3. 转移 100-4000 个细胞到新离心管中，400 g 离心 4 分钟沉淀细胞，小心弃上清（培养基）。

4. 将细胞沉淀重悬于 50 uL 自备的 PBS 溶液中，使其终浓度为 2-80 个细胞/uL。

5. 在干净的培养皿上点加数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴，加入 5 uL 细胞悬浮液到一个小液滴中，然后再从一个小液滴中转移 5 uL 到第

二个小液滴，如此系列稀释样品数次，使得其浓度接近每 2.5 uL 液体中含 1 个细胞，放冰上待用。

二、用卵裂球（blastomere，2-8 细胞胚胎）制备单个细胞：

6. 在培养皿中点数个含 5 uL 胚胎裂解液的小液滴。

7. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。

8. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。

9. 在后一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。

10. 取单个细胞，转移到数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂液。

11. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的 2.5 uL 样品并转移到一个200 uL 的 PCR 管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品

中不含细胞）。

三、用单细胞裂解液裂解细胞

12. 在显微镜下用显微注射仪取 2.5 uL 样品，确认含一个细胞后，将其转移到一个含 2.5 uL 单细胞裂解液的 PCR 管中。好同时设置无样品阴性对照（2.5 uL 样品中不含细胞）。

13. 在 2.5 uL 样品中，显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。

14. 裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。四、单细胞裂解物的 PCR 扩增

15. 细胞裂解物从-80℃中取出后，65℃保温 10 分钟，取出后放冰上待用。

16. 以一半或全部上步操作得到的细胞裂解物为模板，按常规方法进行 PC反应。