产品名称：鸭瘟病毒(DPV)检测试剂盒(荧光-PCR法)

规 格： 50T
检测方法： 实时荧光 PCR

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

产 地： 中国

用 途： 仅用于科研实验

鸡马立克病毒(MDV)检测试剂盒(PCR法)

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

水样便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

水样便 13000rpm 离心 2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；疑似污染的水直接取 100μL

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数 个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

 

鸡马立克病毒(MDV)核酸检测试剂盒(PCR法)实验操作

1.模板制备（样本制备区）
建议使用配套水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒系列产品，具体过程详见产品说明书。
2.添加模板（模板添加区，放置于冰盒上进行）
剪下所需测试数的已含有反应液的PCR管，放置在室温待解冻后，离心30秒后揭开封口膜，向每管反应液中分别加入5μL模板，顺序为NG、待测样品模板、PG-VH-P。盖好配套的PCR管盖后，涡旋混匀30s，离心1min，立即进行PCR扩增反应。
3. 扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量PCR仪，荧光基团选择FAM，淬灭基团选择TAMRA。

Lactose Peptone Broth

伊红美蓝琼脂 (EMB) 250g 弱选择性培养基，用于分离肠道致病菌，特别是大肠杆菌

Eosin-Methylene Blue Agar

亮绿琼脂 250g 用于饮用水，水源水中沙门氏菌选择性增菌

Brilliant Green Lactose Broth

亮绿乳糖培养基 250g 用于饮用天然矿泉水中大肠杆菌的检验（GB标准）

Brilliant Green Lactose Medium

品红亚硫酸钠琼脂（远滕氏琼脂） 250g 用于饮用水、水源水中总大肠菌群的选择性分离和确证

Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar

去氧胆酸盐琼脂 250g 用于大肠杆菌固体平板测定，肠道菌选择性分离

Desoxycholate Lactose Agar

结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) 250g 用于大肠菌群的固体平板检测（SN标准）

Violet Red Bile Agar

结晶紫中性红胆盐MUG琼脂（VRBA-MUG） 100G 用于大肠菌群和大肠杆菌的固体平板检测（BAM）

Violet Red Bile Agar with MUG

MR-VP培养基 250g 用于大肠杆菌的甲基红和VP试验（SN标准）

Methyl Red Voges Proskauer Broth

肠道菌计数琼脂 (VRBDA) 250g 用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别

Violet Red Bile Dextrose Agar