北京旭鑫盛科仪器设备有限公司
主营产品: 研磨机
实验室快速组织样品研磨仪-旭鑫盛科-国产快速组织样品研磨仪品牌
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组织研磨仪研磨鱼肉组织实验具体操作
以下内容是由北京骏腾斯瑞有限公司提供,希望对同行业有所帮助!
①取两块背部鱼肉,每块五克左右;
②用剪刀将其剪碎,分别装入两个研磨罐,同时每罐再放入2颗直径15mm研磨珠,然后旋紧研磨罐,将罐固定在中通量组织研磨仪中;
③将研磨频率设定在1800次/分钟,研磨时间设为3-5分钟,然后启动仪器;
④时间到,仪器自动停止,取出样品即可。
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DNA的粗提
1) 将高通量组织研磨仪研磨好的样品取出于65℃水浴45min,中途间隔(轻柔)振荡三次混匀;
2) 冷却后加入等体积:易戊醇(24:1),轻柔颠倒混匀使乳化10min;
3) 7000g-8000g离心10min(18-20℃);
4) 吸取上清于另一干净的离心管中;
5) (根据需要可用氯放:易戊醇如上法重复抽提一次,吸取上清);
6) 加入与上清液等体积
7) 离心法沉淀DNA;
8) 在75%乙醇中漂洗DNA数分钟以上,用Tip头吸干乙醇;
9) 用1ml 75%乙醇再漂洗一次;
10) 沉淀于室温或64℃以下的恒温箱中干燥片刻至刚出现半透明,不要过度干燥;
11) 用50μlTE溶解沉淀,可用65℃水浴助溶,DNA粗提物可用于粗略PCR等。
利用高通量组织研磨仪对要进行DNA提取的植物样品研磨的好处在于:研磨过程中,不会对植物组织造成破坏,可根据需要选择干磨、湿磨及冷冻研磨,封闭式的样品管,避免样品交叉污染。
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每50~100mg 组织加入0.2体积 TRIzol
1.加钢球1颗,设置研磨仪参数:12单位振频,1min,每种样品基本充分匀浆
2. 将上述匀浆液每0.2体积 TRIzol 试剂用量的匀浆液中加入0.04体积氯方,盖紧管盖,手动剧烈震摇15 秒钟,然后室温静置2~3 分钟。
3. 4℃ 10,000g 离心10 分钟。
4. 小心吸取上层水相(无色)加入到新试管中,同时计算所吸取的水相体积。不必过多吸取,防止吸入DNA和蛋白杂质(中间层,白色)。
5. 加入所吸取水相等体积预冷的异丙淳,盖紧管盖,轻轻摇匀。
6. 室温静置10 分钟,待RNA 充分沉淀(为减少RNA 降解,此步骤可省略)。
7. 4℃ 10,000g 离心10 分钟。
8. 将上清弃除(注意别丢弃沉淀),每管加入0.2体积75%乙醇润洗,盖紧管盖,轻轻晃动试管,以去除残留的异丙淳和盐份。4℃ 7,500g 离心5 分钟。
9. 将上清弃除(注意别丢弃沉淀),打开管盖,将RNA 沉淀干燥(室温挥发或真空干燥)。注意RNA 沉淀不可完全干燥,否则难以溶解。
10. 将RNA 沉淀溶解于适量的无RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全,将使OD260/OD280≤1.6。此RNA 溶液可用于进一步实验,或者-70℃保存。