1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR

样本采集、存放及运输：

1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；

2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（zui多冻融3次）；

3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。

使用方法：

巴西果仁PCR检测试剂盒注：所有试剂使用前需完全解冻，混合均匀，6,000rpm离心数秒后使用。

1.样本处理（样本处理区）

待检样本的核酸提取可采用RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等，具体提取方法请参照相关说明书；阳性质控品及阴性质控品无需提取，可直接使用。

2. 扩增试剂准备（PCR前准备区）

取N个（N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品）PCR反应管，每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量，两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。

组分每头份用量FMD  RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。

1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s，转移至样本处理区。

2.加样（样本处理区）

3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl，盖紧管盖，于6,000rpm离心10s，转移至扩增区。

PCR反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子*很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

巴西果仁PCR检测试剂盒

芸香叶苷

大鼠补体片断*(C*)

磷脂酶D

苯甲氧羰酰琥珀酰亚胺

人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)

线粒体呼吸链复合体Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶测试盒

大鼠内皮素1(ET-1)

人迟现抗原4(VLA4) 

鸡弓形虫循环抗原(TCA)

葡萄糖脱氢酶（GCDH)测试盒

人血管紧张肽酶A(ATA) 

大鼠吡啶酚(PYD)

人胰激肽原酶(PK) 

几丁质酶测试盒

鲁米诺单钠盐

灿烂甲酚蓝

大鼠血管舒缓激肽(BK)

D-(-)水杨苷

人坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)

鸡白痢抗体检测(PD) 

肉碱乙酰转移酶

人沙眼衣原体(CT)

大鼠乙醛脱氢酶(ALDH)

对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷

鹿胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)