【产品名称】

通用名称：兔出血症病毒2型(RHDV-2)荧光PCR检测试剂盒

【包装规格】48T/盒

Name ：Rabbit hemorrhagic disease virus type 2 (RHDV-2) nucleic acid detection kit (RT-PCR fluorescence probe method)

兔出血症病毒2型(RHDV-2)荧光PCR检测试剂盒【预期用途】

本试剂盒适用于检测动物腺、肝、脾、肺组织及人痰、血液等标本中分离出的指标，用于指标的定量检测辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采对指标基因设计特异性的引物和探针，用荧光 PCR 技术对指标的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称	规 格
核酸提取液	1.5mL×2 管
酶液	50μL×1 管
反应液	1.0mL×1 管
阳性质控品	50μL×1 管
阴性质控品	250μL×1 管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

兔出血症病毒2型(RHDV-2)荧光PCR检测试剂盒【使用方法】

样品处理（样本处理区）

样本前处理

组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；棉拭子取 100μL 进行提取。

【标本采集】

病死或扑杀猪，无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；生猪灭菌

棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中

【标本采集】

病死或扑杀猪，取分泌物、血液、*、扁桃体、*和淋巴结等

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本

运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

组织样品：称取组织样品约 0.5g，置于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，匀浆后取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；

痰、尿液等液体样品：取 100μL 于灭菌离心管中；

血液样品：取抗凝血下层血细胞 50μL，加入 100μL 双蒸水吹匀。

DNA 提取

对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000

rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒

（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂	反应液	酶液
用量（样本数为 N）	20μL	1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

PCR 扩增（核酸扩增区）

将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）

NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。

推荐循环参数设置：

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

结果分析判定

结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。

阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

检测方法的局限性

样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。

质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

【参考文献】

国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1280-2003 国境口岸鼠疫检验规程[S].北京:科学出版社, 2003.

张志凯, 海荣, 蔡虹, 等. 鼠疫耶尔森菌的多重 PCR 检测方法[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2007.

吉林省质量技术监督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶尔森菌核酸的测定-荧光PCR 方法[S].

兔出血症病毒2型(RHDV-2)荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

患病动物：腺、肝、脾、肺组织、粪便、血液人：痰；尿液、血液

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【产品图片】

上海烜雅生物科技有限公司生产的兔出血症病毒2型(RHDV-2)荧光PCR检测试剂盒质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。

请直接向我司客服索取说明书

本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

兔出血-症病毒2型(RHDV-2)荧光PCR检测试剂盒 产品：

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1191    寨卡（zika）病毒核-酸检测试剂盒（RT-PCR荧光探针法）

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1192    黄热病毒（YFV）核-酸检测试剂盒（RT-PCR荧光探针法）

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1193    布尼亚病毒（BV）核-酸检测试剂盒（RT-PCR荧光探针法）

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1194 登革热病毒4型(DFV-IV)核-酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1195 登革热病毒1型(DFV-I)核-酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1196    病毒及原生生物类荧光PCR试剂盒

动物源性成分    XY-SG-D-1197    猪源性成分(Porcine)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

动物源性成分    XY-SG-D-1198    牛源性成分(Bovine)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

动物源性成分    XY-SG-D-1199    羊源性成分(Ovine)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

动物源性成分    XY-SG-D-1200    鸡源性成分(Chicken)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)