试剂的准备

20X洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20X洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.自动洗板机；每孔注入洗液350ML，浸泡1min,洗板5次。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放加4℃。

2.设置标准品也和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50ML；

3.样本孔先加待测样本10ML，再加样本稀释液40ML；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100ML，用封板膜封信反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min.

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A.B各50ML，37℃避光孵育15min.

7.每孔加入终止液50ML,15min内，在450NM波长处测定各孔的OD值