准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                   微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                   毫升

产品说明书                                   1份

普通PCR反应流程：

组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

反应五要素：

天花病毒PCR检测试剂盒参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子*很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

使用方法 ：   

1 实验所需器材与试剂

1.1 器材

1）PCR仪

2）PCR反应管

3）电泳仪及水平电泳槽

4）高速离心机

5）微量移液器及移液器吸头

1.2 试剂

1）琼脂糖

2）EB（溴化乙锭）

3）去离子水或双蒸水

注意事项：   

5.1使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。

5.2 操作时应尽量少说话，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性；整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增应分区域进行，以避免交叉污染。 5.3 实验时，试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀（混匀时禁止激烈振荡，只需要进行上下倒置多次进行混匀）。

5.4 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上PCR仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。

5.5细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测灵敏度，建议细胞在不含青霉素和链霉链等抗生素中进行培养2-3天后送样检测。

rabbit Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen, PⅠCP Elisa Kit盐酸多巴酚丁胺（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit Collagen Type Ⅰ, Col Ⅰ Elisa Kit苯妥英（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit Collagen Type Ⅰ, Col Ⅰ Elisa Kit金刚烷（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit Collagen Type Ⅱ, Col Ⅱ Elisa Kit盐酸普罗帕酮（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit Collagen Type Ⅱ, Col Ⅱ Elisa Kit盐酸普罗帕酮Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit N-terminal procollagen Ⅲ propeptide, PⅢNP Elisa Kit呫吨酸（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit N-terminal procollagen Ⅲ propeptide, PⅢNP Elisa Kit呫吨酮（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit procollagen Ⅲ N-terminal peptide, PⅢNT Elisa Kit 甲基丁香酚（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit procollagen Ⅲ N-terminal peptide, PⅢNT Elisa Kit 香叶醇（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

链霉蛋白酶/链丝菌蛋白酶/链霉菌蛋白酶品牌 CAS号：9036-06-0 英文名字：PronaseE 物理性状及指标： 外观：白色或微褐色粉末 简介：为从灰色链霉菌(Streptomycesgriseus)中分离出的一种非特异蛋白水解酶(Protease)的专有名称。分子量一般为20000。易溶于盐水和稀盐溶液，最适pH值7.8～8.0 用途及描述：科研试剂，裂开蛋白质的肽键，有极强的蛋白水解作用，能水解纤维蛋白、黏蛋白。 储存条件：室温，避光防潮密闭干燥。

磷酸二酯酶II使用说明书 CAS号：9068-54-6 英文名字：PhosphodiesteraseIIfromBovineSpleen 物理性状及指标： 外观：冻干粉 比活性：>1.2U/mg 用途及描述：科研试剂 储存条件：-15~-20°C避光防潮密闭干燥。

磷酸肌酸钠盐四水*钱 CAS号：922-32-7 英文名字：Creatinephosphate 分子式：C4H8N3Na2O5P 分子量：255.08 物理性状及指标： 外观：白色结晶粉末 溶解性：溶于水，微溶于乙醇 纯度：>99% 硫酸盐：<0.01% 铁：<0.001% 肌酸：<0.6% 用途及描述：科研试剂

麦芽糖酶（麦芽提取）*有卖 英文名字：maltase(ExtractfromMalt) 分子式： 分子量： 麦芽糖酶（麦芽提取）的溶解性，麦芽糖酶（麦芽提取）在水中的溶解性，麦芽糖酶（麦芽提取）在生理盐水中的溶解性，麦芽糖酶（麦芽提取）在PBS缓冲液中的溶解性，麦芽糖酶（麦芽提取）在DMSO、乙醇等有机溶剂中的溶解性， 麦芽糖酶（麦芽提取）在细胞实验方面的应用，麦芽糖酶（麦芽提取）在大鼠等动物实验方面的应用。

木瓜蛋白酶(2000U/MG)品牌 CAS号：9001-73-4 英文名字：Papain 简介：瓜蛋白酶对动植物蛋白、酯、酰胺等有非常强的水解能力，是一种广谱酶制剂 用途及描述：科研试剂，用于产生抗体的Fab片段。因其对某些组织的作用效果更好、破坏性更低，因此还用于细胞解离 储存条件：2~8°C，避光防潮密闭干燥。

木瓜蛋白酶(800u/mg)使用说明书 CAS号：9001-73-4 英文名字：Papain 分子式， 分子量 物理性状及指标： 外观：白色粉末 溶解性：可溶于水和甘油，几乎不溶于多数有机溶剂 酶活：≥800000u/g 干燥失重：≤8.0% 用途及描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面。木瓜蛋白酶微半胱氨酸蛋白酶，可裂解碱性氨基酸、亮氨酸或甘氨酸的肽键。*pH值为6.0-7.0，也可水解酯和酰胺。用于多肽合成。 用于生产抗体的Fab片段；由于对某些组织很少损伤，所以也用于细胞裂解。裂解氨基酸（亮氨酸或甘氨酸）。用于产生抗体的Fab片段。因其对某些组织的作用效果更好、破坏性更低，因此还用于细胞解离。 储存条件：-20℃，避光防潮密闭干燥。

尿素酶,脲酶(巨豆)*钱 CAS号：9002-13-5 英文名字：UreasefromJackbean 物理性状及指标： 外观：冻干粉 酶活：>45U/mg 用途及描述：科研试剂。催化尿素的水解，最适pH=6.0。它能够被重金属抑制。25°C,pH7.6是，一单位尿素酶一分钟能氧化1微摩尔的NADH。脲酶催化尿素水解成二氧化碳和氨。 脲酶是参与氮代谢和尿素降解。脲酶可以用于不同样本的尿素测定，如豆类1。它可能用于病原体以及重金属离子的检测。 储存条件：室温，避光防潮密闭干燥。

Rabbit coagulation factor